ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡檢測試劑盒

貨號：wts1022 產品名稱： ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡檢測試劑盒，Annexin V是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側，細胞發生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。在細胞發生凋亡時，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發生早于細胞核的變化，而此階段Propidium Iodide（PI）不能通過細胞膜。細胞壞死時，雖然也會發生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時細胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進入細胞與細胞核中的核酸結合，發出紅色熒光。所以Annexin V-FITC（綠色熒光）常與鑒定細胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來區分凋亡細胞與死亡細胞。此試劑盒主要用于流式細胞儀。
操作步驟:  

 1. 調整待測細胞的濃度為 5×105-1×106個/ml 。 

 2. 取1ml 細胞，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清。 

 3. 加入 1ml 預冷的PBS ，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用

胰酶消化，再用PBS 洗滌）。 

 4. 重復步驟 3 兩次。 

 5. 將細胞重懸于 200μ l Binding Buffer 。 

 6. 加入 10 μ l Annexin V-FITC和10 μ l PI ，輕輕混勻，避光室溫反應15 分鐘  或4 ℃反應 30 分鐘。 

 7. 加入 300 μl Binding Buffer ，在1 小時內用流式細胞儀檢測。 

 8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。  

注意事項:  

  為保證得到理想的實驗結果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。  

 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。  

 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide 是光敏物質，在保存與操作時請注意避光。  

 3.Propidium iodide（PI ）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。  

 4.在細胞洗滌的最后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實驗結果。  

 5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進行 Annexin V-FITC 染色，上機前 5 分鐘再加

入PI 染色。 
 

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