貨號：wts1022 產(chǎn)品名稱： ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡檢測試劑盒，Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細(xì)胞核的變化，而此階段Propidium Iodide（PI）不能通過細(xì)胞膜。細(xì)胞壞死時(shí)，雖然也會發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時(shí)細(xì)胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。所以Annexin V-FITC（綠色熒光）常與鑒定細(xì)胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來區(qū)分凋亡細(xì)胞與死亡細(xì)胞。此試劑盒主要用于流式細(xì)胞儀。
操作步驟:  

 1. 調(diào)整待測細(xì)胞的濃度為 5×105-1×106個(gè)/ml 。 

 2. 取1ml 細(xì)胞，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清。 

 3. 加入 1ml 預(yù)冷的PBS ，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000rpm ，4 ℃離心10 分鐘，棄上清（對于貼壁細(xì)胞，先用

胰酶消化，再用PBS 洗滌）。 

 4. 重復(fù)步驟 3 兩次。 

 5. 將細(xì)胞重懸于 200μ l Binding Buffer 。 

 6. 加入 10 μ l Annexin V-FITC和10 μ l PI ，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15 分鐘  或4 ℃反應(yīng) 30 分鐘。 

 7. 加入 300 μl Binding Buffer ，在1 小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測。 

 8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細(xì)胞混合液離心，取細(xì)胞沉淀涂片，再進(jìn)行觀察。  

注意事項(xiàng):  

  為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。  

 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。  

 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在保存與操作時(shí)請注意避光。  

 3.Propidium iodide（PI ）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。  

 4.在細(xì)胞洗滌的最后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。  

 5.PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進(jìn)行 Annexin V-FITC 染色，上機(jī)前 5 分鐘再加

入PI 染色。 
 

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