植物維生素D(VD)ELISA試劑盒說明書

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ELISA 試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯板：一塊（ 96 孔）

2. 標準品（凍干品）： 2 瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至 1ml ，蓋好后靜置 10 分鐘以上，然后反復顛倒 / 搓動以助溶解，其濃度為 1,600 pg/ml ，將其稀釋為 400 pg/ml 后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別稀釋成 400 pg/ml ， 200 pg/ml ， 100 pg/ml ， 50 pg/ml ， 25 pg/ml ， 12.5 pg/ml ， 6.25 pg/ml ，樣品稀釋液直接作為標準濃度 0 pg/ml ，臨用前 15 分鐘內配制。如配制 200 pg/ml 標準品：取 0.5ml （不要少于 0.5ml ） 400 pg/ml 的上述標準品加入含有 0.5ml 樣品稀釋液的 Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3. 樣品稀釋液： 1 × 20ml 。

4. 檢測稀釋液 A ： 1 × 10ml 。

5. 檢測稀釋液 B ： 1 × 10ml 。

6. 檢測溶液 A ： 1 × 120 μ l （ 1:100 ）臨用前以檢測稀釋液 A 1:100 稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（ 100 μ l/ 孔），實際配制時應多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 檢測溶液 A 加 990 μ l 檢測稀釋液 A 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。

7. 檢測溶液 B ： 1 × 120 μ l/ 瓶（ 1:100 ）臨用前以檢測稀釋液 B 1:100 稀釋。稀釋方法同檢測溶液 A 。

8. 底物溶液： 1 × 10ml/ 瓶。

9. 濃洗滌液： 1 × 30ml/ 瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋 25 倍。

10. 終止液： 1 × 10ml/ 瓶（ 2N H2SO4 ）。

11. 覆膜： 5 張

12. 使用說明書： 1 份

ELISA 試劑盒自備物品

1. 酶標儀（建議參考儀器使用說明提前預熱）

2. 微量加液器及吸頭， EP 管

3. 蒸餾水或去離子水，全新濾紙

標本的采集及保存

1.   血清： 全血標本請于室溫放置 2 小時或 4 ℃ 過夜后于 1000 x g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但應避免反復凍融。

2.   血漿： 可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30 分鐘內于 2 - 8 ° C 1000 x g 離心 15 分鐘，或將標本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但應避免反復凍融。

3. 其它生物標本： 請 1000 x g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但應避免反復凍融。

4. 樣本處理： 血清或血漿標本推薦稀釋 5,000 倍。

注：以上標本置 4 ℃ 保存應小于 1 周， -20 ℃ 或 -80 ℃ 均應密封保存， -20 ℃ 不應超過 1 個月， -80 ℃ 不應超過 2 個月；標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

植物維生素D(VD)ELISA試劑盒說明書 操作步驟和檢測范圍（請 來 dian 咨詢索取）