貨號：WTA5954，產品名稱：豬內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒說明書，英文名稱：Porcine Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit，品牌：進口原裝/國產

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     ELISA 試驗 以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。在操作過程中各個環(huán)節(jié)常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給實驗師帶來一些啟發(fā)，提高試驗質量。        下面分析 Elisa 試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法

    1 選擇試劑 選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

    2 加樣   可能原因： 1 ）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2 ）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長 ( 特別是室內溫度較高時 ) ； 3 ）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1 ） 標本為血清： zui 好 將血液先自然存放 1-2 小時后，再用 3000rmp 離心 15 分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時間后， 3000rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內檢測，可放在 2-8 ℃ 冰箱中，若要貯存，則置于 -20 ℃ 的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用 AT 或其他全自動加樣， zui 好 選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。

    3   孵育   可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

    4 洗板   可能原因： 1) 采用手工洗板 , 孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后 zui 好 在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。

    5 顯色   可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的 TMB 顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A 、 B 液應避免接觸金屬器械。

    6 終止   可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。

    7 讀板   如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。   所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸 ; 盡可能實現 ELISA 檢測標準自動化，有效提高檢測質量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現 ELISA 標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

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