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ELISA 試劑盒操作注意事項

1.   試劑盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.   標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取 10 μ L 加樣即可。

4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準備

 20 × 洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1 ： 20 稀釋，即 1 份的 20 × 洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。

2.   自動洗板機：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。

操作步驟

1.   從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4 ℃ 。

2.   設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50 μ L ；

3.   待測樣本孔先加待測樣本 10 μ L ，再加樣本稀釋液 40 μ L ；

4.   隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（ HRP ）標記的檢測抗體 100 μ L ，用封板膜封住反應(yīng)孔， 37 ℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min 。

5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6.   每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。

7.   每孔加入終止液 50 μ L ， 15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

結(jié)果判斷

  繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng) OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

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