大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒說明書

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ELISA 試劑盒操作步驟

1 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4 ℃ 。

2 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50 μ L ；

3 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10 μ L ，再加樣本稀釋液 40 μ L ；

4 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（ HRP ）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100 μ L ，用封板膜封住反應(yīng)孔， 37 ℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min 。

5 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。

7 每孔加入終止液 50 μ L ， 15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

結(jié)果判斷

  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng) OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

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