貨號(hào)：WTA5322，產(chǎn)品名稱：大鼠視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒abcam代理商，英文名稱：Rat Retinol-binding protein,RBP ELISA Kit，品牌：進(jìn)口原裝/國(guó)產(chǎn)

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     ELISA 試驗(yàn) 以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。在操作過(guò)程中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給實(shí)驗(yàn)師帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。        下面分析 Elisa 試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法

    1 選擇試劑 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

    2 加樣   可能原因： 1 ）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2 ）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng) ( 特別是室內(nèi)溫度較高時(shí) ) ； 3 ）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： 1 ） 標(biāo)本為血清： zui 好 將血液先自然存放 1-2 小時(shí)后，再用 3000rmp 離心 15 分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時(shí)間后， 3000rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在 2-8 ℃ 冰箱中，若要貯存，則置于 -20 ℃ 的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用 AT 或其他全自動(dòng)加樣， zui 好 選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。

    3   孵育   可能原因： 1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

    4 洗板   可能原因： 1) 采用手工洗板 , 孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后 zui 好 在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

    5 顯色   可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的 TMB 顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3) A 、 B 液應(yīng)避免接觸金屬器械。

    6 終止   可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

    7 讀板   如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。   所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸 ; 盡可能實(shí)現(xiàn) ELISA 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn) ELISA 標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。

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