人腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

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ELISA 結(jié)果判定常用的幾種方法

    1) 目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于 ( 競(jìng)爭(zhēng)法則淺于 ) 陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。

    2) 以樣品孔的 OD 值大于陰性對(duì)照 OD 值 +2 ～ 3SD ，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

    3) 以 P ／ N 值 ( 陽(yáng)性孔 OD 值／陰性孔 OD 值 ) 大于或等于 2 ． 1 為陽(yáng)性； P ／ N 值小于 2 ． 1 ，但大于 1 ． 5 為可疑； P ／ N 小于 1 ． 5 為陰性。

4) 定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃ 的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于 -20℃ 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .

7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（ HRP ）活性。