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人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒說明書

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更新時間:2019-08-22 17:23:29

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洗滌在 ELISA 過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。 ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在 ELISA 操作中,洗滌是最主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。     洗滌的方式除某些 ELISA 儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:     ( 1 )浸泡式   a. 吸干或甩干孔內反應液; b. 用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去); c. 浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置 1-2 分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短; d. 吸干孔內液體。吸干應徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干; e. 重復操作 c d ,洗滌 3-4 次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。     微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20 ,其濃度可在 0.05%-0.2% 之間,高于 0.2% 時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。     ( 2 )流水沖洗式 流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖洗 2 分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡 2 分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為徹底,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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