人25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒說明書

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ELISA 結果判定常用的幾種方法

    1) 目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于 ( 競爭法則淺于 ) 陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

    2) 以樣品孔的 OD 值大于陰性對照 OD 值 +2 ～ 3SD ，作為陽性結果的閾值。

    3) 以 P ／ N 值 ( 陽性孔 OD 值／陰性孔 OD 值 ) 大于或等于 2 ． 1 為陽性； P ／ N 值小于 2 ． 1 ，但大于 1 ． 5 為可疑； P ／ N 小于 1 ． 5 為陰性。

4) 定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃ 的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃ 保存，但應避免反復凍融 .

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。