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人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒說明書 IFN-α試劑盒

簡要描述:

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更新時間:2019-08-22 17:23:29

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ELISA 實驗注意事項      1.  正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或 BSA 等封閉。      2.  在 ELISA 中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括 :      (1)  固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是 40 孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。     ( 2)  包被抗體 ( 或抗原 ) 的選擇:將抗體 ( 或抗原 ) 吸附在固相載體表面時,要求純度要好 , 吸附時一般要求 PH 9.0 9.6 之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響 , 一般多采用 4 18 24 小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度 (0.1 1.0 10 μ g ml ) 進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的 OD 值。選擇 OD zui大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為 1 10 μ g ml      (3)  酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接 ELISA 法進行初步效價的滴定 ( 見酶標記抗體部份 ) 。然后再固定其它條件或采取 方陣法 ( 包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度 ) 在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。      (4)  酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體 ( OPD ) 有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如 TMB ABTS 是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以 10-30 分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是 H2O2 在臨用前加入。

 

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