四季青胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能:
1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2.起酸堿度緩沖液作用。
3.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。
4.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
5.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
6.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
四季青胎牛血清操作程序:
1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩三十秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復五次,拍干。
2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色十五分鐘。
3. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
4.測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
5.根據(jù)胎牛血清的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。
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